シカジーニアス®分子疫学解析POTキット（黄色ブドウ球菌用）

メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）は医療関連感染の主な原因菌であり、この蔓延防止には菌体
間の相同性などを解析し、適切な拡散予防策を講じる必要があります。
藤田医科大学の鈴木匡弘先生により開発されたPCR-based ORF Typing（POT法）は、マルチプ
レックスPCRを用いて複数の特定遺伝子を同時に増幅し、アガロース電気泳動で検出された増幅バン
ドパターンを解析し、菌体間の相同性を比較する方法です。

特長

●約4時間で分子疫学解析が可能
●パルスフィールドゲル電気泳動（PFGE）と異なり、汎用的な機器で測定可能
●解析結果を数値化（POT値）にすることで、菌体間の相同性を比較可能

キット構成

	個別名称	容量	数量
試薬A	AptaTaq DNA Master（5×Conc.）*	1.0 mL	1 本
試薬B	PCRサプリメント	1.0 mL	1 本
試薬C	プライマーミックスα	0.5 mL	1 本
試薬D	プライマーミックスβ	0.5 mL	1 本
試薬E	ポジティブコントロール	1.0 mL	1 本
試薬F	6×ローディングバッファー（BPB・XC）	1.0 mL	1 本

＊AptaTaq DNA Master（5×Conc.）は、Roche Diagnostics K.K.の商品です。

操作手順

①	黄色ブドウ球菌を単離する（培養）
②	DNA抽出を行い、テンプレートDNAを調製
③	2種類のマルチプレックスPCR
④	アガロースゲル電気泳動
⑤	バンドパターンの読み取り
⑥	POT値の算出
⑦	各検体でのPOT値の比較解析

解析方法

電気泳動のパターン

50 ： 50 bp DNAラダー
P：ポジティブコントロール
1：ATCC^® 700699（MRSA Mu50）
2：ATCC^® BAA-1556（MRSA USA300）
3：ATCC^® 43300（MRSA）
4：ATCC^® 25923（MSSA）
5：ATCC^® 29213（MSSA）
6,7：集団感染事例1から得られた臨床分離株
8,9：集団感染事例2から得られた臨床分離株

藤田医科大学　鈴木匡弘先生のご厚意により、電気泳動パターンの実例データをご提供頂きました。

検出ORFの種類（ターゲット領域）とそのPCR増幅産物サイズ

	POT No.	増幅サイズ（bp）	ターゲット領域
Reaction mixture 1	femA	601	S. aureus positive control
	POT 1-1	530	mecA
	POT 1-2	449	mec gene complex class B
	POT 1-3	355	SCCmec type Ⅱa specific
	POT 2-1	304	Tn554
	POT 2-2	271	プロファージ
	POT 2-3	228	プロファージ
	POT 2-4	197	プロファージ
	POT 2-5	161	プロファージ
	POT 2-6	131	プロファージ
	POT 2-7	106	プロファージ
	POT 2-8	81	Genomic Island
Reaction mixture 2	femA	601	S. aureus positive control
	POT 1-4	477	cassette chromosome recombinase A2
	POT 1-5	388	遺伝的バックグラウンド
	POT 1-6	320	遺伝的バックグラウンド
	POT 1-7	273	mec gene complex class A
	POT 3-1	243	プロファージ
	POT 3-2	197	プロファージ
	POT 3-3	171	プロファージ
	POT 3-4	140	プロファージ
	POT 3-5	115	プロファージ
	POT 3-6	95	プロファージ
	POT 3-7	78	プロファージ

①2つのマルチプレックスPCRの電気泳動結果からバンドパターンを読み取ります。
②この電気泳動のバンドの有無の結果を用いて、POT値解析用エクセルシートに二進法で入力し、3つのカテゴリーのPOT値を算出します。
ⅰ）femAが陽性の場合、その検体は黄色ブドウ球菌であることが確認できます。
また、MRSAの場合、POT 1の値の合計は64以上になります。
ⅱ）検体間のPOT値を比較することで、菌体間の相同性を客観的に推測できます。
ⅲ）集団感染から得られた菌体は、POT 1～3のPOT値が全て同一になります。

カテゴリー	サンプル番号
カテゴリー	1	2	3	4	5	6	7	8	9
POT 1	93	106	95	6	4	93	93	73	73
POT 2	255	77	136	16	58	190	190	156	156
POT 3	96	113	66	35	112	103	103	120	120

製品一覧

製品番号	製品名	保存温度	規格	包装	価格
08178-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR DNA抽出試薬 Cica geneusR DNA extraction reagent	冷蔵	分子生物学用	1pack(120回分)	¥22,000
08180-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 分子疫学解析POTｷｯﾄ(黄色ﾌﾞﾄﾞｳ球菌用) Cica geneusR staph POT kit	冷凍	分子生物学用	1pack(120回分)	¥83,000
08180-97	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 分子疫学解析POTｷｯﾄ(黄色ﾌﾞﾄﾞｳ球菌用) Cica geneusR staph POT kit	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥38,000

・「法律」,「SDS」,「在庫」など詳細情報は、製品番号をクリックいただきご確認いただけます。
・試薬のご購入とご使用に際して

関連製品

POTキット・PCRキット

製品番号	製品名	保存温度	規格	包装	価格
08062-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 分子疫学解析POTｷｯﾄ(ｱｼﾈﾄﾊﾞｸﾀｰ属菌用) Cica geneusR Acineto POT KIT	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥42,000
08143-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR AmpC遺伝子型検出ｷｯﾄ Cica geneusR AmpC Genotype detection kit	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥38,000
08158-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR ｶﾙﾊﾞﾍﾟﾈﾏｰｾﾞ遺伝子型検出ｷｯﾄ2 Cica geneusR Carbapenemase Genotype detection kit 2	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥42,000
08362-97	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 分子疫学解析POTｷｯﾄ(大腸菌用) Cica geneusR E.coli POT kit	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥42,000
08116-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR ESBL遺伝子型検出ｷｯﾄ2 Cica geneusR ESBL Genotype Detection KIT2	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥42,000
08087-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 病原遺伝子検出PCRｷｯﾄ(下痢原性大腸菌用) Cica geneusR Pathogenesis Gene Detection PCR Kit (for Diarrheagenic E.coli)	冷凍	分子生物学用	1pack(100回分)	¥85,000
08187-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 分子疫学解析POTｷｯﾄ(緑膿菌用) Cica geneusR Pseudo POT kit	冷凍	分子生物学用	1pack(50回分)	¥64,000
08179-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR ｺｱｸﾞﾗｰｾﾞ検出ｾｯﾄ Cica geneusR staph coaglase detection set	冷凍	分子生物学用	1pack(50回分)	¥50,000
08180-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 分子疫学解析POTｷｯﾄ(黄色ﾌﾞﾄﾞｳ球菌用) Cica geneusR staph POT kit	冷凍	分子生物学用	1pack(120回分)	¥83,000
08180-97	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 分子疫学解析POTｷｯﾄ(黄色ﾌﾞﾄﾞｳ球菌用) Cica geneusR staph POT kit	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥38,000
08115-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR毒素遺伝子検出ｷｯﾄ(C. difficile用) Cica geneusR Toxin Gene Detection KIT (for C. difficile)	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥42,000

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分離培地

製品番号	製品名	保存温度	包装	価格
72046	ｸﾛﾓｱｶﾞｰMRSAｽｸﾘｰﾝ培地 CHROMagarTM MRSA medium (Prepared media)	冷蔵	10枚	¥2,800
72075	ｸﾛﾓｱｶﾞｰMRSA/ｽﾀｯﾌｱｳﾚｳｽ分画培地 CHROMagarTM MRSA/Staph aureus (Prepared media)	冷蔵	10枚×2	¥6,000

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