シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（大腸菌用）

大腸菌（E. coli）は、自然環境中に広く存在する日和見感染菌です。医療環境においては、食中毒や
院内感染といった集団感染の原因になることが多く、感染管理が重要となります。
本キットは、大腸菌の菌種同定、クローン同定および菌株識別を行うための遺伝子型別キットです。
PCR-based ORF Typing（POT）法では、マルチプレックスPCRを用い、大腸菌の保有する複数の特定遺伝子領域を増幅し、アガロースゲル電気泳動法によって分離されたバンドパターンを数
値化することで、クローン同定および菌株識別を遺伝学的に決定します。

特長

●解析結果を数値化（POT値）することで、E.coil の菌株識別が可能。
●約4時間以内で分子疫学解析が可能。
●特別な装置は不要。
●特にESBL産生大腸菌において、PFGEに近い識別能。

キット構成（30回）

	個別名称	容量	数量
試薬A	AptaTaq DNA Master（5×Conc.）*	240 μL	1 本
試薬B	PCRサプリメント	240 μL	1 本
試薬C	プライマーミックスα	120 μL	1 本
試薬D	プライマーミックスβ	120 μL	1 本
試薬E	ポジティブコントロール	240 μL	1 本
試薬F	6×ローディングバッファー（BPB・XC）	240 μL	1 本

＊AptaTaq DNA Master（5×Conc.）は、Roche Diagnostics K.K.の商品です。

操作手順

①	分離した菌株を純培養
②	DNA抽出を行い、テンプレートDNAを調製
③	2種類のマルチプレックスPCR
④	アガロースゲル電気泳動
⑤	バンドパターンの読み取り
⑥	POT値の算出
⑦	各検体でのPOT値の比較解析

解析方法

電気泳動のパターン
M：50 bp DNAラダー
P：ポジティブコントロール
N：ネガティブコントロール（TE緩衝液）
1-4 ： 大腸菌の分離株

検出ORFの種類（ターゲット領域）とそのPCR増幅産物サイズ

	POT No.	増幅サイズ（bp）	ターゲット領域
Reaction mixture 1	PCR PC	652	E.coil 判定領域
	POT 1-1	511	Genomic Islet-1
	POT 1-2	415	Genomic Islet-2
	POT 1-3	363	Genomic Islet-3
	POT 1-4	307	Genomic Islet-4
	POT 1-5	253	Genomic Islet-5
	POT 1-6	222	Genomic Islet-6
	POT 2-1	178	bla CTX-M-2
	POT 2-2	146	Genomic Island-1
	POT 2-3	123	Genomic Island-2
	POT 2-4	98	Genomic Island-3
	POT 2-5	80	Genomic Island-4
Reaction mixture 2	PCR PC	652	E.coil 判定領域
	POT 2-6	527	Genomic Islet-7
	POT 2-7	436	Genomic Island-5
	POT 2-8	361	bla CTX-M-1
	POT 3-1	311	Genomic Island-6
	POT 3-2	250	Genomic Island-7
	POT 3-3	219	Genomic Islet-8
	POT 3-4	179	Genomic Island-8
	POT 3-5	154	Genomic Island-9
	POT 3-6	122	Genomic Islet-9
	POT 3-7	102	Genomic Island-10
	POT 3-8	79	bla CTX-M-9

①2つのマルチプレックスPCRの電気泳動結果からバンドパターンを読み取ります。
②この電気泳動のバンドの有無の結果を用いて、POT値解析用エクセルシートに二進法で入力し、3つのカテゴリーのPOT値を算出します。
ⅰ）PCR PCが陽性の場合、大腸菌（Escherichia coli ）と判定します。
ⅱ）POT２の値が奇数であればCTX-M-1 group、128 以上であればCTX-M-2 group、
　　POT３の値が奇数であればCTX-M-9 group の各ESBL 遺伝子を保有しています。
ⅲ）検体間のPOT 値を比較することで、E. coli の菌体間の相同性を客観的に推測出来ます。
ⅳ)　集団感染から得られた菌体はPOT 1 ～ 3 のPOT 値が全て同一になります。

解析結果

カテゴリー	サンプル番号
カテゴリー	1	2	3	4
POT 1	20	26	49	49
POT 2	1	144	58	101
POT 3	94	4	215	178

製品一覧

製品番号	製品名	保存温度	規格	包装	価格
08178-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR DNA抽出試薬 Cica geneusR DNA extraction reagent	冷蔵	分子生物学用	1pack(120回分)	¥22,000
08362-97	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 分子疫学解析POTｷｯﾄ(大腸菌用) Cica geneusR E.coli POT kit	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥42,000

★本キットは愛知県と中部大学から特許許諾を得て、製造販売しております。
★他メーカーの商品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーにご確認ください。
★製品の仕様は、製品の改良のため変更する場合がございます。あらかじめご了承ください。

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関連製品

POTキット・PCRキット

製品番号	製品名	保存温度	規格	包装	価格
08062-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 分子疫学解析POTｷｯﾄ(ｱｼﾈﾄﾊﾞｸﾀｰ属菌用) Cica geneusR Acineto POT KIT	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥42,000
08143-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR AmpC遺伝子型検出ｷｯﾄ Cica geneusR AmpC Genotype detection kit	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥38,000
08158-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR ｶﾙﾊﾞﾍﾟﾈﾏｰｾﾞ遺伝子型検出ｷｯﾄ2 Cica geneusR Carbapenemase Genotype detection kit 2	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥42,000
08362-97	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 分子疫学解析POTｷｯﾄ(大腸菌用) Cica geneusR E.coli POT kit	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥42,000
08116-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR ESBL遺伝子型検出ｷｯﾄ2 Cica geneusR ESBL Genotype Detection KIT2	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥42,000
08087-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 病原遺伝子検出PCRｷｯﾄ(下痢原性大腸菌用) Cica geneusR Pathogenesis Gene Detection PCR Kit (for Diarrheagenic E.coli)	冷凍	分子生物学用	1pack(100回分)	¥85,000
08187-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 分子疫学解析POTｷｯﾄ(緑膿菌用) Cica geneusR Pseudo POT kit	冷凍	分子生物学用	1pack(50回分)	¥64,000
08179-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR ｺｱｸﾞﾗｰｾﾞ検出ｾｯﾄ Cica geneusR staph coaglase detection set	冷凍	分子生物学用	1pack(50回分)	¥50,000
08180-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 分子疫学解析POTｷｯﾄ(黄色ﾌﾞﾄﾞｳ球菌用) Cica geneusR staph POT kit	冷凍	分子生物学用	1pack(120回分)	¥83,000
08180-97	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR 分子疫学解析POTｷｯﾄ(黄色ﾌﾞﾄﾞｳ球菌用) Cica geneusR staph POT kit	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥38,000
08115-96	ｼｶｼﾞｰﾆｱｽR毒素遺伝子検出ｷｯﾄ(C. difficile用) Cica geneusR Toxin Gene Detection KIT (for C. difficile)	冷凍	分子生物学用	1pack(30回分)	¥42,000

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分離培地

製品番号	製品名	保存温度	包装	価格
72101	ｸﾛﾓｱｶﾞｰESBL生培地 CHROMagarTM ESBL(prepared)	冷蔵	10枚	¥3,100
72120	ｸﾛﾓｱｶﾞｰｵﾘｴﾝﾀｼｵﾝ/ESBL分画培地 CHROMagarTM Orientation/ESBL Agar	冷蔵	10枚	¥2,800

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